Bestimmung der Sensitivität von Ovarialkarzinomen gegenüber Zytostatika

Abstract

In der vorliegenden Arbeit wurden zwei Methoden zur Bewertung von Chemosensitivität bei Ovarialkarzinomzellen verglichen. <br /> Dazu wurden sowohl Kulturzellen getestet, die aus Tumoren gewonnen und fortlaufend kultiviert wurden, als auch solche die direkt aus ex-vivo Gewebe gewonnen wurden. Zellen beider Herkunft wurden unter Einwirkung verschiedener Zytostatika in Konzentrationsreihen inkubiert und anschließend mit zwei Testmethoden auf ihre apoptotische Aktivität untersucht.<br /> Als eine der beiden Messmethoden wurde der in der klinischen Praxis etablierte ATC-Tumorchemosensitivitäts-Assay (ATP-TCA) genutzt, dessen Messprinzip auf der Messung des ATC-Gehalts zuvor zytostatisch behandelter Zellen beruht. Der ATC-Gehalt wird als Gradmaß für die Zellvitalität bzw. -aktivität und unter Verwendung eines Lumineszenzfarbstoffs bestimmt.<br /> Als zweiter Test wurde die Färbung zytostatisch behandelter Zellen mit Propidiumjodid (PJ) nach Permeabilisierung der Zellmembran (nach Nicoletti et al.) genutzt. Die gefärbten Zellen wurden mit Hilfe fluoreszenz-aktivierter Durchflußzytometrie (FACS) einmessen und ausgewertet.<br /> Für beide Methoden und Zellen beiden Ursprungs wurde der optimale Messzeitpunkt sowie die methodische Streuung ermittelt.<br /> Die Methoden wurden auf die Messung des Ausmaßes von Chemosensitivität und insbesondere der Detektion apoptotischer Aktivität hin verglichen.<br /> Dabei zeigte sich eine durchschnittlich niedrigere gemessene Chemosensitivität in der durchflußzytometrischen Bestimmung mittels Propidiumjodidfärbung. Dafür konnte mit dieser Methode apoptotische Aktivität spezifischer nachgewiesen werden und ein genaueres Bild über den Zustand der Population (in Bezug auf Zellzyklusverteilung und Zustand der Zellen) gewonnen werden.Die Ergebnisse beider Tests korrelierten jedoch in hohem Maße, in Bezug auf die Art der <br /> Hemmung (zeit- bzw. konzentrationsabhängiger Wirkmechanismus). Die Arbeit konnte die Vermutung untermauern, dass die zellulären Effekte von Zytostatika in großem Ausmaß auf apoptotischer Aktivität basieren. <br /> Die Messung der apototischen Aktivität mit Hilfe der durchflußzytometrischen Auswertung auf Basis der PJ-Färbung nach Nicoletti kann als diagnostische Ergänzung der klinisch etablierten ATC-TCA genutzt werden.