Biochemische Analyse der Interaktion von P2X4 und P2X7 und Charakterisierung von P2X7B und genetisch verlinkten P2X4/P2X7-Konkatameren
Biochemische Analyse der Interaktion von P2X4 und P2X7 und Charakterisierung von P2X7B und genetisch verlinkten P2X4/P2X7-Konkatameren
dc.contributor.advisor | Schmalzing, Günther | |
dc.contributor.author | Hawro Yakoob, Sanaria | |
dc.date.accessioned | 2023-02-23T09:50:22Z | |
dc.date.available | 2023-02-23T09:50:22Z | |
dc.date.issued | 23.02.2023 | |
dc.identifier.uri | https://hdl.handle.net/20.500.11811/10655 | |
dc.description.abstract | Das übergeordnete Ziel meiner Arbeit war die Untersuchung der Interaktion von P2X7 und P2X4. Zur Identifikation von potenziellen Interaktionspartnern habe ich den P2X7-Rezeptors von Mensch und Ratten mit den weiteren P2X-Isoformen koexprimiert und nach dem Köder-und Beute-System proteinchemisch analysiert. Eine Heterotrimerisierung von hP2X7 und hP2X4 konnte ich durch Koexpression der C-terminal trunkierten hP2X7-Untereinheit (hP2X71-408 bzw. hP2X71-436) mit der hP2X4-Untereinheit nachweisen. Die Ergebnisse deuten somit daraufhin, dass die hP2X7A-Untereinheit ebenso mit der hP2X4-Untereinheit zu einem Heterotrimer assemblieren würde, da die entscheidende Assemblierungsdomäne in der Ektodomäne liegt.
Zur Erstellung der homomeren und heteromeren Konkatamere wurden die rP2X4- und rP2X7-Untereinheiten in definierter Zusammensetzung aneinander ligiert. Es wurde biochemisch mittels SDS-PAGE untersucht, welchen Einfluss die Linker, die Anordnung der Untereinheiten und die Protease-Inhibitoren auf die Expression der Konkatamere haben. Die Untersuchung zeigte, dass lange Linker für eine starke Expression und kurze Linker für eine verringerte Erzeugung von Abbau-Produkten am besten geeignet sind. Ein letztes Ziel der Arbeit war die Charakterisierung der desensibilisierenden Spleißvariante hP2X7B. Die unterschiedliche Kinetik und der Einfluss der Länge der C-terminalen Endodomäne auf die Kinetik-Eigenschaften der beiden hP2X7-Varianten wurde dargestellt. Um einen direkten Vergleich zu erzielen wurde die C-terminale Endodomäne der hP2X7A-Untereinheit um die abweichende Aminosäuresequenz gekürzt und die unterschiedliche Expression der beiden hP2X7-Varianten biochemisch mittels SDS-PAGE und BN-PAGE sowie elektrophysiologisch mittels der Zwei-Elektroden-Spannungsklemme charakterisiert. Die Desensibilisierung der hP2X7B-Untereinheit bei der ersten ATP-Applikation spricht für die Bildung der zytoplasmatischen Kappe, trotz einer C-terminalen Endodomäne bestehend aus neun Aminosäuren. Zusammengenommen wurde die Heteromerisierung der beiden Untereinheiten P2X4 und P2X7 biochemisch nachgewiesen und homomere P2X4- und P2X7-Konkatamere sowie P2X7B biochemisch verifiziert. | en |
dc.language.iso | deu | |
dc.rights | In Copyright | |
dc.rights.uri | http://rightsstatements.org/vocab/InC/1.0/ | |
dc.subject | P2X7 | |
dc.subject | P2X4 | |
dc.subject | P2X7B | |
dc.subject | Konkatamere | |
dc.subject | Heteromerisierung | |
dc.subject.ddc | 615 Pharmakologie, Therapeutik | |
dc.title | Biochemische Analyse der Interaktion von P2X4 und P2X7 und Charakterisierung von P2X7B und genetisch verlinkten P2X4/P2X7-Konkatameren | |
dc.type | Dissertation oder Habilitation | |
dc.publisher.name | Universitäts- und Landesbibliothek Bonn | |
dc.publisher.location | Bonn | |
dc.rights.accessRights | openAccess | |
dc.identifier.urn | https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:hbz:5-69555 | |
ulbbn.pubtype | Erstveröffentlichung | |
ulbbnediss.affiliation.name | Rheinische Friedrich-Wilhelms-Universität Bonn | |
ulbbnediss.affiliation.location | Bonn | |
ulbbnediss.thesis.level | Dissertation | |
ulbbnediss.dissID | 6955 | |
ulbbnediss.date.accepted | 15.02.2023 | |
ulbbnediss.institute | Mathematisch-Naturwissenschaftliche Fakultät : Fachgruppe Pharmazie / Pharmazeutisches Institut | |
ulbbnediss.fakultaet | Mathematisch-Naturwissenschaftliche Fakultät | |
dc.contributor.coReferee | Müller, Christa E. | |
ulbbnediss.contributor.gnd | 1283001071 |
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