Isolierung von kleinen funktionalen Peptiden durch mRNA Display

Abstract

In der vorliegenden Arbeit wurde das mRNA Display zur Selektion von kleinen funktionalen Peptiden eingesetzt. Diese in vitro Selektionstechnik ermöglicht die kovalente Verknüpfung von Genotyp und Phänotyp eines Proteins. Die für ein Protein kodierende mRNA wird dazu über das Antibiotikum Puromycin als Vermittler an das translatierte Protein geknüpft. In der vorliegenden Arbeit wurde das mRNA Display zur Selektion von kleinen funktionalen Peptiden eingesetzt. Diese in vitro Selektionstechnik ermöglicht die kovalente Verknüpfung von Genotyp und Phänotyp eines Proteins. Die für ein Protein kodierende mRNA wird dazu über das Antibiotikum Puromycin als Vermittler an das translatierte Protein geknüpft.<br /> So konnten aus einer Bibliothek mit 1.2*10¹¹ verschiedenen Mitgliedern Peptide isoliert werden, die an den Blutgerinnungsfaktor humanes α-Thrombin</nobr> binden. Zusätzlich zu den Bindungskonstanten konnten noch die Bindungsepitope am Thrombinprotein sowie die minimalen Bindungsmotive ermittelt werden. <br /> Die selektierten Peptide können die Aktivität des Thrombins beeinflussen, indem sie die Bildung eines Blutgerinnsels hinauszögern oder die Aktivierung von Protein C herabregulieren.<br /> Die mRNA Display Technologie stellt ein äußerst flexibles und erfolgversprechendes System zur Generierung von Peptidliganden, -effektoren oder -inhibitoren dar, das in den unterschiedlichsten Disziplinen der Grundlagenforschung und der medizinischen Forschung weiterhin Verwendung finden wird.