Untersuchungen zur Expression von Connexingenen und der Funktion Gap Junctionvermittelter Kommunikation in embryonalen Stammzellen der Maus

Abstract

Während der Präimplantationsentwicklung des Embryos wird eine Vielzahl an Connexinisoformen exprimiert. Das vollständige Expressionsprofil sowie die Funktion der Connexine bzw. der Gap Junction-Kanälen ist jedoch weitestgehend unbekannt. Embryonale Stammzellen (ES-Zellen), gewonnen aus der inneren Zellmasse der Blastozyste, stellen eine Momentaufnahme des Präimplantationsembryos an Tag 3,5 der Entwicklung dar. Die Zellen können durch die Wahl geeigneter Kulturbedingungen nahezu unbegrenzt vervielfältigt werden, wobei sie ihren pluripotenten Charakter erhalten. Darüberhinaus lassen sie sich gezielt in verschiedene Zelltypen differenzieren. Somit sind ES-Zellen ein geeignetes Modellsystem, um die Expression und Funktion von Connexinen während der Embryonalentwicklung zu untersuchen. <br /> Ziel dieser Arbeit war zum einen die vollständige Charakterisierung der Connexin- und Pannexinexpression in ES-Zellen. Darüber hinaus sollte die Funktion von Connexinen bzw. Gap Junctions in embryonalen Stammzellen mit Hilfe von pharmakologischen Gap Junction-Inhibitoren bzw. von siRNAs untersucht werden. Außerdem wurden Cx43/Cx45 doppeldefiziente ES-Zellen hergestellt und charakterisiert. Diese Zellen wurden weiterhin verwendet um die Funktion von Connexinen und Gap Junction-vermittelter Kommunikation in embryonalen Stammzellen sowie während der ES-Zelldifferenzierung zu untersuchen.